Diez consejos para mejorar su técnica de pipeteo

Las pipetas son herramientas indispensables en las operaciones de laboratorio. Cuando surgen problemas con los datos de pipeteo, a menudo cuestionamos el rendimiento de la pipeta, pero la técnica de pipeteo también juega un papel fundamental en el éxito o el fracaso de un experimento. Desatender la orientación técnica sobre el pipeteo puede provocar importantes pérdidas de tiempo y financieras. El uso adecuado de las pipetas no sólo afecta la precisión de los resultados experimentales sino también la seguridad del personal del laboratorio. Este artículo recopila consejos para el uso de pipetas. Si sigue estas pautas, la precisión y reproducibilidad de su pipeteo pueden mejorar hasta en un 5 %.

Cómo funcionan las pipetas:

1. Establezca el volumen de desplazamiento y el pistón se moverá a la posición especificada.

2. Pulsa el botón y el pistón desciende expulsando un determinado volumen de aire. El volumen de aire expulsado es igual al volumen de desplazamiento.

3. Suelte el botón y se creará un vacío parcial dentro del cabezal de succión. Bajo presión atmosférica, el líquido ingresa al cabezal de succión.

4. Presione el botón nuevamente y la presión del aire dentro del manguito del pistón y el cabezal de succión aumentará. El aire comprimido empuja el líquido fuera del cabezal de succión.

Diez consejos para mejorar su técnica de pipeteo

Colocando la punta

Al colocar la punta, asegúrese de que esté bien sujeta y que no haya fugas. Presione firmemente el mango de la pipeta y gírelo ligeramente si es necesario. El uso de puntas originales fabricadas por el fabricante de la pipeta garantizará un mejor sellado.

Funcionamiento incorrecto: Golpear la punta con fuerza. Este método puede dañar la punta e incluso desgastar el mango de la pipeta, afectando así su sellado.

Configuración de rango

Para lograr una mayor precisión, el volumen pipeteado debe estar entre el 35% y el 100% del rango nominal de la pipeta. Cuando el volumen pipeteado es inferior al 35 % del rango nominal de la pipeta, se recomienda cambiar a una pipeta con un rango menor.

Ajuste de rango: al ajustar de un rango más pequeño a un rango más grande, gire continuamente en la dirección del rango deseado. Una vez que la rotación exceda un tercio de vuelta más allá del rango deseado, vuelva a ajustar al rango deseado. Al ajustar de un rango mayor a un rango menor, gire continuamente directamente al rango deseado.

Ángulo de inmersión de la punta

El ángulo de la pipeta portátil también afecta la precisión. Al pipetear, el ángulo que se desvía de la dirección vertical no debe exceder los 10 grados.

Al pipetear, la punta debe sumergirse lo más verticalmente posible en la muestra y no debe desviarse de la posición vertical más de 20°. Para pipetas con microvolúmenes, pipetear en ángulo vertical puede mejorar la precisión en un 2,5%.

Profundidad de inmersión de la punta

Sumergir la punta a la profundidad adecuada puede mejorar la precisión en un 5%. Si la punta se sumerge demasiado profundamente, el aire dentro de la punta se comprimirá, provocando una aspiración excesiva de líquido; por el contrario, si la punta se sumerge demasiado superficialmente, entrará aire, lo que provocará la formación de burbujas y una transferencia de volumen imprecisa.

Profundidades de inmersión recomendadas:

2–10 µl: 1–2 mm

20–200 µL: 2–3 mm

200–2000 µl: 3–6 mm

Por encima de 2000 μL: 6 a 10 mm

Aspiración

Al transferir diferentes muestras, mantenga un ritmo de aspiración constante y presione o suelte el botón a una velocidad constante y constante. Controlar la velocidad de aspiración; si es demasiado rápido, puede provocar que entre líquido o aerosol en la pipeta, contaminando componentes como el pistón. Después de la aspiración, mantenga la punta en el líquido durante un segundo antes de retirarla lentamente. Esto es particularmente importante para pipetas de gran volumen o al aspirar muestras viscosas.

Dispensación y soplado de líquido.

Primero, presione el pistón a la primera posición para dispensar líquido, haga una pausa breve y luego presione a la segunda posición para soplar líquido.

Mantener un ritmo y una velocidad de pipeteo constantes le ayudará a lograr resultados ideales y más reproducibles y a mejorar la precisión en un 5 %.

Seleccione pipeteo directo o inverso según el tipo de líquido

Presione el émbolo hasta la primera posición, sumerja la punta en el líquido y luego suelte el émbolo para aspirar el líquido. Retire la pipeta del líquido, presione el émbolo hasta la segunda posición para dispensar todo el líquido. Para todas las soluciones que no sean líquidos viscosos o volátiles, el pipeteo en modo estándar (o directo) es más exacto y preciso que el modo inverso. El modo inverso normalmente resulta en una dosificación excesiva. Por lo tanto, se recomienda evaluar el impacto de la dosificación excesiva en el experimento y ajustarlo según sea necesario.

Cambios de temperatura

La temperatura ideal para pipetear y calibrar es 21,5°C ± 1°C. Asegúrese de que el líquido y el equipo estén equilibrados a temperatura ambiente antes de pipetear. Evite operar en áreas con corrientes de aire, luz solar directa o fluctuaciones significativas de temperatura, ya que estas condiciones pueden reducir la precisión del pipeteo. El uso prolongado de la pipeta con la mano puede hacer que el calor de la mano caliente la pipeta, lo que provoca la expansión térmica del aire interno y produce resultados inexactos. Por lo tanto, no se debe mantener la pipeta en la mano durante períodos prolongados. Cuando no esté en uso, lo mejor es colgarlo de un soporte o dejarlo enfriar sosteniéndolo en la mano.

Enjuague

Asegúrese de distinguir entre consejos de enjuague y situaciones en las que el enjuague no es apropiado:

Antes de aspirar líquido, repetir la aspiración y expulsar completamente una determinada cantidad de líquido al menos 2-3 veces. Enjuagar la punta 2 o 3 veces puede formar una película homogénea dentro de la punta, lo que puede mejorar la precisión en un 0,2%.

El enjuague puede afectar negativamente a los resultados al transferir soluciones frías o calientes, como al pipetear desde un baño de hielo o cuando la temperatura de la solución supera los 37 °C. El enjuague puede dar como resultado una tasa de error de hasta el 5%. Por lo tanto, ¡no enjuague con líquidos a alta o baja temperatura!

Pipetear

Una buena técnica de pipeteo también puede mejorar la precisión en un 1%. Antes de pipetear, toque ligeramente el costado de la botella de almacenamiento con la punta para eliminar con cuidado las gotas del exterior de la punta, asegurándose de que estén alejadas de la abertura de la punta para evitar que el líquido salga de la punta. Después de pipetear y antes de soltar el émbolo, toque ligeramente el costado del recipiente con la punta para eliminar cualquier líquido residual de la punta. La tensión superficial ayudará a expulsar el líquido residual de la punta.

Técnicas de pipeteo para muestras especiales

En la mayoría de los casos, se utilizan pipetas para transferir soluciones acuosas. Sin embargo, es posible que ocasionalmente encuentre muestras especiales, como muestras muy volátiles, de alta viscosidad o de alta densidad. Si necesita transferir muestras especiales con frecuencia, se recomienda comprar una pipeta con un mecanismo de pistón externo. Aunque los costes de los consumibles son ligeramente superiores, esto garantiza la precisión del pipeteo. Si solo transfiere muestras especiales ocasionalmente y tiene recursos financieros limitados, considere las siguientes técnicas de pipeteo, que pueden ayudar a mejorar la precisión del pipeteo.

Pipeteo de muestras volátiles

Antes de pipetear, asegúrese de enjuagar la pipeta dos veces; después de aspirar la muestra, dispensarla lo más rápido posible.

Pipeteo de muestras de alta viscosidad

Utilice el modo de pipeteo inverso: al aspirar, presione el botón de aspiración/dispensación hasta la segunda posición (segundo punto de parada) y al dispensar, presione el botón hasta la primera posición (primer punto de parada). Además, se requiere un tiempo de permanencia de 3 a 5 segundos tanto durante la aspiración como durante la dispensación.

Transferencia de muestras de alta y baja densidad

Los valores de precisión de las pipetas se basan en la transferencia de agua pura. Si la densidad de la muestra difiere significativamente de la del agua, la precisión también se reducirá significativamente. Por lo tanto, es necesario determinar la densidad de la muestra antes de pipetear y ajustar el ajuste del volumen al producto del volumen de la muestra y la densidad. Por ejemplo, si una muestra tiene una densidad de 1,2 g/cm³ y es necesario transferir 300 μL, el volumen debe establecerse en 360 μL. Este es sólo un método de ajuste aproximado; para realizar ajustes precisos, se deben utilizar herramientas auxiliares, como dispositivos de medición o balanzas, para realizar cálculos precisos.

Transferencia de muestras de alta y baja temperatura

No enjuague la punta antes de pipetear; utilice una punta nueva para cada operación de pipeteo; complete tanto la aspiración como la dispensación lo más rápido posible.