Las pipetas son herramientas indispensables en las operaciones de laboratorio. Cuando surgen problemas de datos de pipeteo, a menudo cuestionamos el rendimiento de la pipeta, pero la técnica de pipeteo también juega un papel fundamental en el éxito o el fracaso de un experimento. Descuidar la orientación técnica de pipeteo puede dar lugar a un tiempo significativo y pérdidas financieras. El uso adecuado de pipetas no solo afecta la precisión de los resultados experimentales, sino también la seguridad del personal de laboratorio. Este artículo compila consejos para usar pipetas. Siguiendo estas pautas, la precisión y la reproducibilidad de su pipeteo pueden mejorar hasta en un 5%.
Cómo funcionan las pipetas:
Establezca el volumen de desplazamiento y el pistón se mueve a la posición especificada.
Presione el botón y el pistón desciende, expulsando un cierto volumen de aire. El volumen de aire expulsado es igual al volumen de desplazamiento.
Suelte el botón y se crea un vacío parcial dentro del cabezal de succión. Bajo presión atmosférica, el líquido entra en la cabeza de succión.
Presione el botón nuevamente, y la presión de aire dentro de la manga del pistón y la cabeza de succión aumentan. El aire comprimido empuja el líquido de la cabeza de succión.
10 consejos para mejorar su técnica de pipeteo
Ajustar la punta
Al colocar la punta, asegúrese de que esté de forma segura y que no haya fugas. Presione hacia abajo firmemente sobre la manija de la pipeta y gire ligeramente si es necesario. El uso de consejos originales fabricados por el fabricante de pipetas garantizará un mejor sello.
Operación incorrecta: golpear la punta con fuerza. Este método puede dañar la punta e incluso usar la manija de la pipeta, lo que afecta su sello.
Ajuste de rango
Para lograr una mayor precisión, el volumen pipetido debe estar dentro del 35% al 100% del rango nominal de la pipeta. Cuando el volumen pipetido es inferior al 35% del rango nominal de la pipeta, se recomienda cambiar a una pipeta con un rango más pequeño.
Ajuste de rango: cuando se ajuste de un rango más pequeño a un rango más grande, gire continuamente en la dirección del rango deseado. Una vez que la rotación exceda un tercio de un giro más allá del rango deseado, ajuste al rango deseado. Cuando se ajuste de un rango más grande a un rango más pequeño, gire continuamente directamente al rango deseado.
Ángulo de inmersión de punta
El ángulo de la pipeta portátil también afecta la precisión. Al pipetear, el ángulo que se desvía de la dirección vertical no debe exceder los 10 grados.
Al pipetear, la punta debe sumergirse lo más vertical posible en la muestra, y no debe desviarse de la posición vertical en más de 20 °. Para las pipetas con microvolúmenes, la pipeteo en un ángulo vertical puede mejorar la precisión en un 2,5%.
Profundidad de inmersión de la punta
Inmersar la punta a la profundidad apropiada puede mejorar la precisión en un 5%. Si la punta está sumergida demasiado profundamente, el aire dentro de la punta se comprimirá, causando una aspiración excesiva de líquido; Por el contrario, si la punta se sumerge demasiado superficialmente, el aire se atraerá, lo que lleva a la formación de burbujas y una transferencia de volumen inexacta.
Profundidades de inmersión recomendadas:
2–10 μl: 1–2 mm
20–200 μl: 2–3 mm
200–2,000 μl: 3–6 mm
Por encima de 2,000 μl: 6–10 mm
Aspiración
Al transferir diferentes muestras, mantenga un ritmo de aspiración consistente y presione o suelte el botón a una velocidad constante y constante. Controlar la velocidad de aspiración; Si es demasiado rápido, puede hacer que el líquido o el aerosol ingresen a la pipeta, contaminando componentes como el pistón. Después de la aspiración, mantenga la punta en el líquido durante un segundo antes de quitarla lentamente. Esto es particularmente importante para pipetas de alto volumen o cuando aspira muestras viscosas.
Dispensando y soplando líquido
Primero, presione el pistón a la primera posición para dispensar el líquido, haga una pausa brevemente, luego presione a la segunda posición para soplar líquido.
Mantener un ritmo y velocidad de pipeteo consistentes lo ayudará a lograr resultados ideales y más reproducibles y mejorar la precisión en un 5%.
Seleccione la pipeteo hacia adelante o de revertir en función del tipo de líquido
Presione el émbolo a la primera posición, sumerja la punta en el líquido, luego suelte el émbolo para aspirar el líquido. Retire la pipeta del líquido, presione el émbolo a la segunda posición para dispensar todo el líquido. Para todas las soluciones distintas de los líquidos viscosos o volátiles, la pipeting de modo estándar (o delantero) es más precisa y precisa que el modo de inversión. El modo inverso generalmente resulta en exceso de dispersión. Por lo tanto, se recomienda evaluar el impacto de la exceso de discurso en el experimento y ajustar según sea necesario.
Cambios de temperatura
La temperatura ideal para la pipeteo y la calibración es 21.5 ° C ± 1 ° C. Asegúrese de que el líquido y el equipo estén equilibrados a la temperatura ambiente antes de la pipeteo. Evite operar en áreas con corrientes de aire, luz solar directa o fluctuaciones de temperatura significativas, ya que estas condiciones pueden reducir la precisión de la pipeteo. El uso prolongado de mano de la pipeta puede causar calor de la mano para calentar la pipeta, lo que lleva a la expansión térmica del aire interno y dando como resultado resultados inexactos. Por lo tanto, la pipeta no debe mantenerse en la mano durante períodos prolongados. Cuando no está en uso, es mejor colgarlo en un soporte o dejar que se enfríe sosteniéndolo en la mano.
Enjuague
Seguro que distinguir entre las puntas de enjuague y las situaciones donde el enjuague no es apropiado:
Antes de aspirar el líquido, repita la aspiración y expulse por completo una cierta cantidad de líquido al menos 2-3 veces. Enjuagar la punta 2-3 veces puede formar una película homogénea dentro de la punta, lo que puede mejorar la precisión en un 0.2%.
El enjuague puede afectar negativamente los resultados al transferir soluciones calientes o frías, como la pipeteo de un baño de hielo o cuando la temperatura de la solución excede los 37 ° C. El enjuague puede dar lugar a una tasa de error de hasta 5%. Por lo tanto, ¡no enjuague con líquidos de alta temperatura o baja temperatura!
Pipeteo
La buena técnica de pipeteo también puede mejorar la precisión en un 1%. Antes de pipetear, toque ligeramente el lado de la botella de almacenamiento con la punta para quitar cuidadosamente las gotas del exterior de la punta, asegurando que estén lejos de la apertura de la punta para evitar que el líquido fluya fuera de la punta. Después de pipetear y antes de liberar el émbolo, toque ligeramente el lado del recipiente con la punta para eliminar cualquier líquido residual de la punta. La tensión superficial ayudará a expulsar el líquido residual de la punta.
Técnicas de pipeteo para muestras especiales
En la mayoría de los casos, las pipetas se usan para transferir soluciones acuosas. Sin embargo, ocasionalmente puede encontrar muestras especiales como muestras altamente volátiles, de alta viscosidad o alta densidad. Si con frecuencia necesita transferir tales muestras especiales, se recomienda comprar una pipeta con un mecanismo de pistón externo. Aunque los costos de consumo son ligeramente más altos, esto garantiza la precisión de la pipeteo. Si solo ocasionalmente transfiere muestras especiales y tiene recursos financieros limitados, considere las siguientes técnicas de pipeteo, lo que puede ayudar a mejorar la precisión de la pipeteo.
Muestras volátiles de pipeteo
Antes de pipetear, asegúrese de enjuagar la pipeta dos veces; Después de aspirar la muestra, prescindirla lo más rápido posible.
Muestras de alta viscosidad de pipeteo
Use el modo de pipetización inversa: cuando aspira, presione el botón Aspirado/dispensar a la segunda posición (segundo punto de parada), y cuando presente, presione el botón a la primera posición (primer punto de parada). Además, se requiere un tiempo de permanencia de 3 a 5 segundos durante la aspiración y la dispensación.
Transferencia de muestras de alta densidad/baja densidad
Los valores de precisión de las pipetas se basan en la transferencia de agua pura. Si la densidad de la muestra difiere significativamente de la del agua, la precisión también se reducirá significativamente. Por lo tanto, es necesario determinar la densidad de la muestra antes de pipetear y ajustar el ajuste de volumen al producto del volumen y densidad de la muestra. Por ejemplo, si una muestra tiene una densidad de 1,2 g/cm³ y se deben transferir 300 μl, el volumen debe establecerse en 360 μl. Este es solo un método de ajuste aproximado; Para ajustes precisos, las herramientas auxiliares, como los dispositivos o equilibrios de medición, deben usarse para cálculos precisos.
Transferencia de muestras de alta temperatura/baja temperatura
No enjuague la punta antes de pipetear; Use un nuevo consejo para cada operación de pipeteo; Complete tanto la aspiración como la dispensación lo más rápido posible.
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