Cómo utilizar el microtomo rotatorio

Se utiliza un microtomo rotatorio para preparar secciones de tejido para examen y diagnóstico patológico. Cortar secciones de parafina de alta calidad requiere una gran habilidad y experiencia. El uso adecuado del instrumento garantiza la precisión, seguridad y alta calidad de las muestras. Esta guía proporciona instrucciones paso a paso para ayudar a los usuarios a operar eficazmente el microtomo rotatorio, ya sea para histología de rutina o aplicaciones de investigación.

¿Qué es un microtomo rotatorio?

La sección en parafina es la técnica de preparación más común en histología. Su aplicación no se limita a observar la morfología y estructura de las células normales, sino que también es el método principal utilizado en patología y medicina forense para estudiar, observar y determinar cambios en la morfología del tejido celular. El corte en parafina también se utiliza ampliamente en otros campos de investigación científica. El microtomo rotatorio es una herramienta auxiliar de uso común para la inclusión en parafina en patología.

Principales aplicaciones de los micrótomos rotatorios

1. Laboratorios: se utilizan para observar la estructura morfológica de tejidos celulares normales de animales y plantas.

2. Laboratorios clínicos: utilizados para observar la estructura morfológica de tejidos celulares normales de animales y plantas.

3. Universidades y centros de investigación biológica: se utilizan para estudiar, observar y determinar cambios morfológicos en los tejidos celulares.

4. Empresas farmacéuticas y laboratorios médicos: utilizados para inmunohistoquímica, inmunofluorescencia, secuenciación del genoma, etc.

Tipo de microtomo

Microtomo rotativo

Características:

1. Equipado con un portacuchillas

2. Solo se puede instalar una cuchilla a la vez para recortar y seccionar.

Ventajas: Permite un corte continuo, especialmente adecuado para biopsias, incluidas muestras de biopsia con aguja.

Microtomo deslizante

Características:

1. Durante el recorte, la cuchilla se desliza con la muestra; Durante el corte, la muestra permanece estacionaria mientras la cuchilla se desliza.

2. Puede instalar dos cuchillas para recortar y seccionar.

Ventajas:

1. Ahorra tiempo al cortar grandes bloques de tejido.

2. Puede instalar dos cuchillas simultáneamente para recortar y seccionar, ahorrando en el uso de la cuchilla.

3. Se utiliza principalmente para la investigación de tejidos grandes y la observación de tejidos multicapa.

Desventajas:

1. Sólo se puede cortar una vez por sesión.

2. Requiere la instalación de un purificador de aire; eliminar la electricidad estática aumenta los costos.

3. No apto para pequeñas secciones de tejido, incluidas biopsias endoscópicas.

4. Cortar tejidos pequeños requiere mucho tiempo y ralentiza la velocidad de corte.

Microtomo vibratorio

Características:

1. Corta tejido fresco sin fijación ni refrigeración.

2. Corta secciones más gruesas: 20–100 μm

Ventajas:

1. Las sustancias solubles en lípidos y los antígenos de superficie del tejido se conservan mejor que en las muestras de tejido no congeladas, no forman cristales y no causan ningún daño a los antígenos de la muestra de tejido.

2. Se utiliza principalmente para demostrar la distribución de anticuerpos en el sistema nervioso, especialmente adecuado para la observación por microscopía electrónica inmunológica.

Tipos de microtomos rotatorios

Microtomo rotatorio manual:

Operación de rotación del volante. El uso prolongado del engranaje del motor puede causar desgaste, lo que afecta la precisión de la inyección y da como resultado una visualización de datos insuficiente, pero tiene un costo relativamente bajo.

Microtomo rotatorio semiautomático:

Semiautomática, equipada con pomo de inyección o panel de control externo.

El sistema de inyección eléctrica garantiza la precisión de la inyección. La máquina tiene una vida útil más larga, proporciona una visualización de datos más completa y se alinea mejor con los escenarios clínicos.

Microtomo rotatorio automático:

Funcionalidad de corte totalmente automática, equipada con pomo de inyección o panel de control externo, totalmente automatizado.

Microtomo criostato:

Su tecnología criogénica permite procesar muestras rápidamente, reduciendo el impacto de la fijación química en el tejido. Normalmente funciona entre -20 °C y -30 °C para preservar la integridad estructural y la morfología celular de las muestras de tejido.

Componentes y funciones del microtomo rotatorio

Componentes principales para el funcionamiento diario de micrótomos rotativos:

Inyección:

El sistema de inyección de alta precisión utiliza componentes clave como rodamientos de rodillos transversales, husillos, motores paso a paso y bielas para garantizar una calidad de corte estable y cumplir con los requisitos de precisión de inyección de 0,5 μm.

Fijación:

El puntero visual presenta escalas marcadas en el cabezal de la muestra, que admiten ajustes reversibles en tiempo real, particularmente adecuado para tejidos más gruesos o secciones incrustadas preparadas en ángulos de corte especiales.

Rebanar:

El codificador de alta precisión recibe rápidamente señales de corte automáticas y, al finalizar el corte, el freno digital se activa automáticamente para asegurar el volante, lo que mejora la seguridad.

Seguridad:

El sistema de volante incorpora un mecanismo de doble bloqueo: bloqueo y bloqueo del volante; el dispositivo de retracción proporciona protección al usuario.

Cómo utilizar un microtomo rotatorio

I. Secciones semifinas

1. Conecte la fuente de alimentación y encienda el interruptor principal;

2. Seleccione el espesor de la sección: el rango típico de espesor de la sección es de 0,25 a 100 μm. Utilice los botones '+' y '-' para ajustar el valor del espesor, siendo la unidad μm;

3. Coloque el bloque integrado en el centro del cabezal de corte, apriete el tornillo de bloqueo y asegure la muestra según sea necesario;

4. Instale la hoja de vidrio con la bandeja de agua (asegúrese de que el volante esté bloqueado antes de instalar la hoja) y alinee el borde de la hoja con la muestra;

5. Seleccione el modo de corte: corte automático o manual. Después de seleccionar el modo, el instrumento vuelve a cero y comienza el conteo de secciones;

6. Recoja las secciones: use un anillo de recuperación de secciones para recuperar las secciones delgadas que flotan en el agua y fíjelas a un tobogán. Secar a 40–60°C, teñir con TBO, lavar y montar con 50% de glicerol para observación y fotografía.

II. Secciones de parafina

1. Conecte la fuente de alimentación y encienda el interruptor principal;

2. Seleccione el espesor de la sección: ajuste el valor del espesor usando los botones '+' y '-', unidad: μm;

3. Coloque el bloque integrado preparado en el centro del cabezal de corte, gire el tornillo de fijación y asegure la muestra según los requisitos;

4. Instale el portacuchillas, inserte una cuchilla desechable, una cuchilla de acero de tungsteno o una cuchilla de acero de corte estándar (asegúrese de que el volante esté bloqueado antes de instalar la cuchilla) y alinee el borde de la cuchilla con la muestra;

5. Seleccione el modo de corte: Corte automático o corte manual; después de seleccionar el modo de corte, el instrumento vuelve a cero y comienza el conteo de cortes;

6. Recoja el material cortado: use un cepillo para levantar la tira de cera y colóquela en la caja de la tira de cera;

7. Montaje: Utilice un cuchillo de punta redondeada para cortar la tira de cera, seleccione el material intacto y colóquelo sobre un portaobjetos recubierto con aceite de clara de huevo (agregue agua destilada al aceite de clara de huevo para mantener el material flotando en la superficie);

8. Secado: En mesa de secado con calefacción eléctrica, una vez que el material esté plano, colocar el portaobjetos en una bandeja esparcidora y secar en estufa de temperatura constante a 36°C durante aproximadamente cuatro días o en secadora a 60°C durante dos horas;

9. Desencerado, tinción y montaje: Desencere el material con xileno y luego tiñe según el propósito experimental. Montar y secar el material utilizando resina neutra o resina canadiense.

Diez consejos para mejorar la calidad de las secciones

Mantenga la hoja afilada: reemplace o afile la hoja con regularidad para garantizar el filo y reducir el daño de la sección.

Ajuste la velocidad de corte: ajuste la velocidad de corte según el tipo de muestra para evitar secciones desiguales causadas por una velocidad excesiva.

Mantenga la muestra fresca: utilice un sistema de enfriamiento o cubitos de hielo para mantener una temperatura baja para la muestra y reducir la deformación del tejido.

Asegúrese de que la mesa de corte esté nivelada: asegúrese de que la mesa del micrótomo esté nivelada para evitar cortes torcidos causados ​​por ángulos de corte incorrectos.

Limpie el equipo: limpie periódicamente el microtomo para evitar que el polvo o los residuos afecten la calidad del corte.

Ajuste el grosor de la rebanada: ajuste el grosor de la rebanada según sea necesario para evitar rebanadas que sean demasiado gruesas o demasiado delgadas.

Compruebe la fijación de la muestra: asegúrese de que la muestra esté fijada de forma segura para evitar que se afloje durante el corte.

Utilice un medio de corte apropiado: seleccione un medio de corte apropiado para mejorar la planitud de las rebanadas.

Evite el corte excesivo: Evite el corte continuo prolongado para evitar daños a la muestra o el sobrecalentamiento de la cuchilla.

Calibre periódicamente el equipo: calibre periódicamente el microtomo para garantizar su precisión y estabilidad.

Consejos de mantenimiento del microtomo rotatorio

1. No utilice objetos duros o afilados para raspar la máquina;

2. Limpie la superficie con agua limpia, no con agentes químicos;

3. Evite sacudir o golpear la máquina durante el funcionamiento;

4. Apriete todos los tornillos de la máquina utilizando las herramientas proporcionadas cada dos meses;

5. Si la máquina no se va a utilizar durante un período prolongado, desenchufe el cable de alimentación, guarde el equipo adecuadamente y cubra los componentes ópticos de imágenes con un paño para evitar la acumulación de polvo.

Conclusión

En conclusión, dominar el uso de un micrótomo rotatorio es esencial para lograr secciones de tejido de alta calidad en diversas aplicaciones de laboratorio. Si sigue los procedimientos operativos adecuados, realiza un mantenimiento regular y garantiza la configuración correcta, puede mejorar tanto la precisión como la longevidad de su equipo. Con la práctica, podrá producir resultados consistentes y confiables para su análisis histológico.